Data Teknikal
Arahan penggunaan lajur/plat untuk penyahgaraman c18
Pengenalan Produk
Lajur/plat penyahgaraman C18 diisi dengan matriks gel silika C18, yang kumpulan berfungsi, oktadesil, mempunyai hidrofobisiti tinggi dan sifat pengekalan yang sangat baik untuk sebatian bukan kutub. Lajur/plat penyahgaraman C18 boleh menyerap molekul primer/oligo/DNA dengan DMT tanpa pengekalan garam, menghasilkan produk primer/oligo/DNA ketulenan tinggi.
Panduan Pemilihan
BM Life Sciences menawarkan lajur/plat penyahgaraman C18 dalam pelbagai saiz dan anda boleh memilih lajur penyahgaraman yang betul berdasarkan kepekatan primer/oligo. Untuk pemprosesan kelompok, anda boleh memilih plat penyahgaraman 96 telaga.
| Nombor Produk | norma | Spesifikasi oligonukleotida yang berkenaan | Langkah-langkah rujukan |
| SPEC18W150 | 50mg/1mL | 10nmol - 200nmol | Langkah 5 |
| SPEC18W3100 | 100mg/3mL | 10nmol - 600nmol | Langkah 1 |
| SPEC18W3300 | 300mg/3mL | 10nmol - 2 .opmol | Langkah 2 |
| SPEC18W61000 | 1g/6mL | 1 umol - 6 umol | Langkah 3 |
| SPEC18W9630 | 30mg/96 plat perigi | 5nmol - 100nmol | Langkah 4 |
| SPEC18W9650 | 50mg/96 plat perigi | 10nmol - 200nmol | Langkah 4 |
| SPE15C18W9680 | Plat 80mg/96-telaga(1.5ml plat 96-telaga) | 10nmol - 500nmol | Langkah 5 |
| SPE23C18W9680 | Plat perigi 80mg/96(2.3ml plat perigi 96) | 10nmol - 500nmol | Langkah 5 |
Nota
Lajur/Plat Pembersihan C18 juga boleh menyah garam produk mentah dan primer/oligo selepas penulenan HPLC dan PAGE, lihat langkah 5 untuk butiran.
Reagen
Gred Kromatografi Asetonitril
TEH 0.1 M, PH7.0
0.5 M NaCl
Larutan pembilasan (5% asetonitril dilarutkan dalam 0.5 M Nacl)
3% asid trifluoroacetic (TFA)
Air ternyahiion
20% asetonitril
Penampan TE: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, PH 8.0
Langkah 1
Penyediaan Sampel
Tambah 0.5 M NacI kepada sampel oligonukleotida kepada isipadu 2 mL.
Mengaktifkan lajur penyahgaraman
Pengaktifan: 1 mL asetonitril digunakan untuk mengaktifkan lajur.
Pengimbangan: Lajur imbangan dengan 1 mL larutan TEAA 0.1 M (PH7.0).
Proses pembersihan
1. Lulus 2 mL larutan yang mengandungi oligonukleotida melalui lajur penyahgaraman.
2. Bilas lajur 2 kali dengan 1 mL larutan pembilasan untuk membuang urutan yang tidak berjaya.
3. Bilas lajur 2 kali dengan 1 ml air ternyahion untuk menghilangkan garam.
4. Bilas lajur 2 kali dengan 1 ml asid trifluoroacetik 3% untuk mengeluarkan DMT dan perhatikan bahawa lapisan terjerap bertukar menjadi merah oren; dan
5. Bilas lajur penyahgaraman dua kali dengan 1 mL air ternyahion untuk mengeluarkan asid trifluoroasettik dan garam sisa.
6. Elut 1ml 20% asetonitril dan pasang.
Langkah 2
Penyediaan Sampel
Tambah 0.5 M NacI ke dalam sampel oligonukleotida kepada isipadu 4 mL.
Mengaktifkan lajur penyahgaraman
Pengaktifan: 2 mL asetonitril digunakan untuk mengaktifkan lajur.
Pengimbangan: Seimbangkan lajur 2 mL dengan 0.1 M TEAA (PH 7.0).
Proses pembersihan
1. Lulus 4 mL larutan yang mengandungi oligonukleotida melalui lajur penyahgaraman.
2. Bilas lajur 2 kali dengan 2 ml larutan pembilasan untuk mengeluarkan urutan yang tidak berjaya.
3. Bilas lajur 2 kali dengan 2 ml air ternyahion untuk menghilangkan garam ;)
4. Bilas lajur 2 kali dengan 2ml asid trifluoroacetic 3% untuk mengeluarkan DMT, lapisan penjerapan telah bertukar menjadi merah oren.
5. Bilas lajur dengan air demineral dua kali dengan 2 mL air ternyahion untuk mengeluarkan asid trifluoroacetic dan garam sisa.
6. Elut 2ml 20% asetonitril dan pasang.
Langkah 3
Penyediaan Sampel
Tambah 0.5 M Nac ke dalam sampel oligonukleotida kepada isipadu 10 mL.
Mengaktifkan lajur penyahgaraman
Pengaktifan: 5 mL asetonitril digunakan untuk mengaktifkan lajur.
Pengimbangan: Lajur diseimbangkan dengan 10 mL TEAA 0.1 m (PH 7.0).
Proses pembersihan
1. 10 mL larutan yang mengandungi oligonukleotida disalurkan melalui lajur penyahgaraman.
2. Lajur telah dibasuh dua kali dengan 5 mL larutan pembilasan untuk membuang urutan yang tidak berjaya.
3. Bilas lajur dua kali dengan 5 mL air ternyahion untuk mengeluarkan garam.
4. Basuh lajur dua kali dengan 5 mL asid trifluoroacetic 3% untuk mengeluarkan DMT dan perhatikan bahawa lapisan penjerapan telah bertukar menjadi merah oren.
5. Bilas lajur dua kali dengan 5ml air ternyahion untuk mengeluarkan asid trifluoroacetic dan sisa garam.
6. Cairkan 5 ml 20% asetonitril dan kumpulkan.
Langkah 4
Penyediaan sampel
Tambah 0.5 M Nacl ke dalam sampel oligonukleotida kepada isipadu 0.5 mL.
Pengaktifan plat 96-telaga
Pengaktifan: 0.5 mL asetonitril dialirkan melalui setiap telaga plat 96 telaga.
Keseimbangan: Seimbangkan plat 96 telaga dengan 0.5 mL larutan TEAA 0.1 M (pH 7.0).
Prosedur pembersihan
1. Lulus 0.5 mL larutan yang mengandungi oligonukleotida melalui plat 96 telaga.
2. Bilas plat 96-telaga 2 kali dengan 0.5 mL larutan pencuci untuk menghilangkan urutan yang tidak baik.
3. Bilas plat 96-telaga 2 kali dengan 0.5 mL air ternyahion untuk mengeluarkan garam.
4. Basuh plat 96-telaga 2 kali dengan 0.5ml asid trifluoroacetik 3% untuk mengeluarkan DMT, dan perhatikan bahawa lapisan penjerapan bertukar menjadi merah jingga; dan
5. Bilas plat 96-telaga dua kali dengan 0.5 mL air ternyahion untuk mengeluarkan asid trifluoroacetik dan sisa garam.
6. Tuangkan 0.5ml 20% asetonitril dan kumpulkan bahan tersebut.
Langkah 5
Penyediaan sampel
Tambah 0.5 M Nacl kepada sampel oligonukleotida kepada isipadu 1.2/2 mL.
Pengaktifan plat 96-telaga
Pengaktifan: Langkau 1-4 ml 0. 5 mL asetonitril melalui setiap telaga pada plat 96 telaga.
Pengimbangan: Seimbangkan plat 96 telaga dengan 1-4 mL 0.5 mL larutan TEAA 0.1 M (PH 7.0).
Proses pembersihan
1. Lulus 0.5-2 mL larutan yang mengandungi oligonukleotida melalui plat 96 telaga.
2. Bilas plat 96-telaga 2 kali dengan 1/2 mL larutan pencuci untuk menghilangkan urutan yang malang ;)
3. Bilas plat 96-telaga dua kali dengan 1/2 mL air ternyahion untuk mengeluarkan garam.
4. 2 kali basuh plat 96-telaga dengan 1/2ml asid trifluoroacetic 3% untuk mengeluarkan DMT, dan perhatikan bahawa lapisan penjerapan bertukar menjadi merah oren;
5. Bilas plat 96-telaga dengan 1/2 mL air ternyahion 2 kali untuk mengeluarkan asid trifluoroasettik dan sisa garam.
6. Tuangkan 1/2ml 20% asetonitril dan kumpulkan bahan tersebut.
Langkah 6
Reagen
Gred Kromatografi Asetonitril
TEH 0.05 M, PH 7.0
TEH 2 M, PH 7.0
Air ternyahion (untuk penyahgaraman dan penulenan molekul RNA tanpa RNase) 60% asetonitril (larut dalam air yang mengandungi 0.5% NH4OH)
20% asetonitril (untuk menyahsinasi molekul DNA atau RNA selepas penyahlindungan)
Penampan TE: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, PH 8.0
Penyediaan Sampel
Oligo tulen HPLC: Tambahkan jumlah TEAA 0.1 M yang sesuai kepada oligos tulen HPLC supaya kepekatan asetonitril akhir ialah ≤5%. Oligos tulen: Larutkan serpihan gel yang mengandungi oligonukleotida dalam 0.05 M TEAA, keluarkan serpihan gel, larutkan oligo dalam sekurang-kurangnya 2 mL 0.1 M TEAA.
Oligos dilarutkan dalam NH4OH atau AMA: Sejat sehingga kering dan larut dalam 2 mL TEAA 0.1 M.
Mengaktifkan Pam Penyahgaraman
Pengaktifan: 1 mL asetonitril digunakan untuk mengaktifkan lajur.
Pengimbangan: Seimbangkan lajur 1 mL 2 M TEAA (pH 7.0).
Prosedur penyahgaraman oligos untuk penulenan HPLC
1. Lulus larutan yang mengandungi oligonukleotida melalui lajur penyahgaraman.
2. Bilas lajur penyahgaraman dua kali dengan 1 mL air ternyahion untuk mengeluarkan garam.
3. Elut melalui lajur 1 ml 60% asetonitril dan kumpulkan.
Prosedur penyahgaraman oligos disucikan dengan kaedah PAAG
1. Lulus larutan yang mengandungi oligonukleotida melalui lajur penyahgaraman.
2. Bilas lajur penyahgaraman dua kali dengan 1 mL air ternyahion untuk mengeluarkan garam.
3. Elut melalui lajur 1 ml 60% asetonitril dan kumpulkan.
Prosedur untuk penyahgaraman oligon DNA selepas sintesis
1. Lulus larutan yang mengandungi oligonukleotida melalui lajur penyahgaraman; dan
2. Bilas lajur 1 mL 0.1M TEAA dua kali untuk membuang urutan yang tidak berjaya.
3. Bilas lajur penyahgaraman dua kali dengan 1ml air ternyahion untuk mengeluarkan garam.
4. Lulus lajur melalui 1 ml asetonitril 20% dan pasang.
Prosedur penyahgaraman RNA oligos selepas sintesis
1. Lulus larutan yang mengandungi oligonukleotida melalui lajur penyahgaraman.
2. Bilas lajur dengan 2 ml 0. 1 M TEAA.
3. Bilas lajur dengan 2 mL air bebas RNase.
4. Lulus 2ml 20% asetonitril (air bebas RNase) melalui lajur, elut dan kumpulkan. Penyimpanan Oligonukleotida
Oligonukleotida yang dilarutkan dalam 20% asetonitril dan disimpan pada suhu 4°C menghalang pertumbuhan mikroorganisma dan sesuai untuk penyimpanan jangka pendek.
Oligonukleotida dalam larutan asetonitril 20% (atau terlarut dalam penimbal beralkali seperti TE) boleh disimpan untuk masa yang lama pada suhu serendah -20 °C.
Oligonukleotida dalam bentuk serbuk lyophilized boleh disimpan untuk masa yang lama.
Amaran
Kuantiti reagen yang digunakan hanyalah cadangan dan harus dioptimumkan dalam setiap kes tertentu.
Kuantiti reagen yang digunakan hanyalah cadangan dan harus dioptimumkan berdasarkan kes demi kes.
Lajur penyahgaraman mesti menjalani keseimbangan pengaktifan yang mencukupi untuk mencairkan sisa pada lajur/plat dan meningkatkan kapasiti pengikatan lajur/plat penyahgaraman. Persampelan oligonukleotida yang disintesis hendaklah dilakukan dengan perlahan untuk mengelakkan serbuk CPG daripada memasuki lajur/plat untuk pembersihan dan pencemaran silang.
Lajur/wafer penyahgaraman C18 menggunakan matriks silika, julat PH terpakai ialah 2-7, PH > 7.5 mudah melarutkan matriks silika, PH
Apabila menggunakan TFA untuk penyahgaraman DMT, perhatikan masa, terlalu lama akan mempunyai kesan mengeluarkan purin.
Dilampirkan
B&M Universal CPG Frits Synthesis Lajur Teknologi Penyahgaraman dan Penucian Pantas
Lajur Sintesis CPG Frits Universal B&M Teknologi Penyahgaraman dan Penulenan Pantas:
B&M Universal CPG Frits diperbuat daripada polietilena ultra-tulen berat molekul ultra tinggi yang diimport dan serbuk CPG yang diimport, diproses oleh teknologi khas, mempunyai kesan sintesis yang baik dalam lajur sintesis, kadar mutasi yang rendah dan kualiti produk yang boleh dipercayai.
Selepas sintesis selesai dalam pensintesis siri Dr.Oligo/Mermade dan ammonia dibubarkan, Oligo boleh dicairkan terus ke lajur sintesis, dan selepas dos dan penyaliran, ia boleh digunakan untuk tindak balas PCR rutin secara langsung tanpa langkah penulenan tambahan, yang mudah dikendalikan, menjimatkan kos dan penghantaran lebih cepat!
Langkah-langkah khusus operasi adalah seperti berikut:
1, Sintesis B&M Universal CPG Frits tiang/pinggan/s sintetik 400ul, 75% campuran air ultratulen asetonitril dibasuh dua kali untuk mengeluarkan reagen sisa sintetik;
2, Lajur/Plat Ammolisis Ammonia Sintetik Frits B&M Universal, 90°C, 80PSI, Ammonia Ammolisis 2-2.5 j;
3, 100% asetonitril 400L basuh lajur/plat sintetik, dua kali;
4、90% Campuran Air Ultratulen Acetonitril 400ul Basuh Lajur/Pinggan Sintetik, Dua kali, Mengepam Kering;
5、Isipadu eluen yang sesuai untuk mengelusi primer pada lajur/plat sintetik, eluen boleh menjadi air ultratulen, boleh menjadi campuran air ultratulen trietilamin 3%, juga boleh menjadi campuran air ultratulen asetonitril 20%.
6、 Larutan elusi boleh diukur, disalurkan, disalirkan, dibungkus dan dihantar.