Data Teknikal
Lajur/plat penyahgaraman arahan sephadex g-25 untuk digunakan
Pengenalan Produk
Lajur/plat penyahgaraman Dextran G-25 terutamanya menggunakan fungsi ayak molekul dalam sebatian polimer gel dextran dengan struktur rangkaian. Disebabkan oleh saiz berat molekul yang berbeza bagi bahan yang dipisahkan, apabila bahan yang dipisahkan melalui gel G-25, bahan dengan berat molekul yang besar (seperti protein) disekat di luar zarah gel dan mengalir keluar melalui celah antara zarah gel, prosesnya pendek dan kelajuan pergerakan adalah pantas, jadi bahan dengan berat molekul besar/plat akan terlebih dahulu keluar dari lajur. Bahan dengan berat molekul yang kecil (contohnya garam) boleh menembusi ke dalam mikropori zarah gel, prosesnya panjang dan perlahan, dan bahan dengan berat molekul yang lebih tinggi mengambil masa lebih lama untuk mengalir keluar dari lajur/plat gel, jadi akhirnya tercuci keluar, dan dengan itu bahan diasingkan.
Parameter media siri Sephadex G-25 ditunjukkan dalam jadual
| Projek | parametrik |
| Ciri-ciri | Gel Putih Kotor |
| Saiz zarah purata (kering) | 150±100μm 92.8 |
| Taburan saiz zarah （45-165μm）% | ≥80 |
| Julat Pisah (Portugis) | 100-5000 |
| Julat Pemisahan (Globulin) | 1000-5000 |
| Nisbah air (ml gam basah/g serbuk kering) | 2.3-2.7 |
| Kadar Aliran Linear(0.3MPA, cm/j) | 697.1 |
| Kadar Aliran Maksimum(cm/j) | 150 |
| Penyelesaian pemeliharaan | 0.2M NaAc 20 peratus etanol |
| keadaan penyimpanan | 4'C-30'C |
Nombor model G menunjukkan jumlah air yang diserap setiap gram gel, contohnya, medium gel G-25 menunjukkan bahawa 2.5 ml air diserap setiap gram gel kering, iaitu pekali pengembangan gel, yang juga saiz liang zarah gel.
Media kromatografi siri Sephadex G-25 digunakan secara meluas untuk pertukaran penimbal, penyahgaraman protein, pengasingan protein dengan berat molekul yang berbeza, dll. Isipadu sampel maksimum untuk penyahgaraman dan penimbalan boleh sehingga 30% daripada isipadu dasar lajur.
Aliran kerja
1. Mengimbangi Pembesar Suara/Tablet: Setelah pembesar suara/tablet dengan G-25 Sefadex yang dipramuat berada dalam kedudukan tegak, imbang lajur/tablet penyahgaraman G-25 dengan penimbal 5 hingga 10 kali ganda isipadu lapisan lajur. (Nota: Penampan ialah penimbal yang dikehendaki untuk diganti, cth PBS, air ternyahion, dsb.; berhati-hati, kawal kadar aliran)
2. Persampelan: Selepas kolum/plat gel diseimbangkan dengan penimbal, pipet sampel dan masukkan perlahan-lahan ke dalam ayak pada permukaan gel, buka penutup bawah dan biarkan sampel perlahan-lahan memasuki gel sehingga ia siram dengan gel. (Nota: Isipadu sampel di bahagian bawah biasanya 10-30% daripada isipadu lapisan lajur, kelikatan sampel tidak boleh terlalu tinggi, jika tidak hayat perkhidmatan kelenjar G25 akan dipendekkan).
3. Elusi: Sampel dielusi dengan penimbal elusi selepas ia memasuki gel sepenuhnya. (Nota: Kadar aliran sampel yang disyorkan ialah kira-kira 1-2 ml/min. Isipadu elusi biasanya 1.2-2.0 kali ganda isipadu sampel).
4. Penulenan dan penjanaan semula: Sesetengah protein didenaturasi dalam larutan garam, jadi mungkin perlu untuk menulenkan protein ini dengan mencuci alas tiang dengan 0.2 M NaOH atau detergen bukan ionik yang lain.
5. Penyimpanan: Selepas eksperimen, simpan dalam larutan natrium azida 0.02% atau larutan etanol 20%.